可见分光光度计操作步骤详解

可见分光光度计是基于物质对特定波长可见光的吸收特性进行分析的常用仪器，广泛应用于教学、常规检测与科研实验等领域。本文将系统介绍其操作流程，帮助使用者规范操作、获取可靠数据。

一、操作前准备

仪器检查与开机

确认仪器处于平稳台面，接通电源。打开主机电源开关，系统自检后进入主界面。预热时间一般建议为15-30分钟，使光源稳定、检测系统达到平衡状态。

样品与试剂准备

根据测定标准（如GB/T261）准备样品与标准溶液。使用匹配的比色皿，装入参比溶液（通常为空白溶剂）与待测样品液。注入液体量适中，外壁需用擦镜纸拭干，避免留下指纹或水渍影响透光。

二、基础测定：光度测量

参数设置

在仪器主界面选择“光度测量"模式。设定测定波长，可通过数字键盘直接输入或从列表中选择。部分仪器支持多波长同时测定，可根据需要添加多个波长点。

基线校准

将装有参比溶液的比色皿放入样品室，关闭盖子。执行“调零"或“基线校正"操作，仪器将自动调整透光率为100%（吸光度为0）。此步骤可消除溶剂与比色皿本身的光吸收影响。

样品测定

取出参比皿，放入样品皿。点击“测量"键，仪器显示该波长下样品的吸光度（A）、透光率（%T）及能量值。记录数据或直接保存至仪器存储器。

三、定量分析：建立标准曲线

标准溶液测定

在“定量测试"模式下，选择标准曲线法（如多点线性拟合）。依次测量一系列已知浓度的标准溶液，仪器自动记录各浓度对应的吸光度值。

曲线拟合与验证

测定完成后，仪器可绘制浓度-吸光度曲线，并给出拟合公式与相关系数。建议使用相关系数评估线性关系。可测定1-2个验证样品检验曲线可靠性。

未知样浓度计算

将未知样品按相同条件处理并测定吸光度，仪器依据标准曲线自动计算并显示浓度结果。

四、进阶功能应用

光谱扫描

用于获取样品在一定波长范围内的吸收光谱。进入“波长扫描"功能，设置起始波长、结束波长及扫描速度。

若需监测反应过程中吸光度随时间的变化，可选择“时间扫描"。设定监测波长、时间区间与取样间隔，启动后仪器自动跟踪记录，可用于反应速率计算。

五、数据保存与仪器维护

数据导出

测定结果可储存于仪器内置存储器，也可通过数据接口连接电脑导出。部分型号支持微型打印机直接打印报告。

结束操作

测量完成后，取出比色皿并清洗干净。关闭仪器电源，填写使用记录。定期清洁样品室，避免灰尘或液体残留影响光学系统。

注意事项：

比色皿需保持透光面清洁，避免划伤。

溶液不可长时间放置于样品室，防止挥发或腐蚀。

若仪器长期不用，建议定期通电维护。

规范的操作流程是保证分光光度计测量准确性与重复性的基础。使用者应结合具体实验要求合理选择功能，并严格遵守相应标准方法进行操作。